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暨南大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)真題篇一
滅菌：是徹底殺菌，即用物理或化學(xué)等方法，殺死物體上的一切微生物以及它們的芽孢或孢子，使物體成為無(wú)菌狀態(tài)。
消毒：是非徹底殺菌，即用物理或化學(xué)等方法，殺死物體上的有害微生物，但不能殺死全部芽孢。
防腐：是抑菌過(guò)程，即用化學(xué)或物理方法，防止或抑制微生物的生長(zhǎng)繁殖。
動(dòng)物細(xì)胞機(jī)械分離法：通過(guò)適當(dāng)?shù)奈锢韺W(xué)處理手段，將動(dòng)物組織解離成單個(gè)細(xì)胞的方法。
動(dòng)物細(xì)胞消化分離法：通過(guò)酶或螯合劑把已經(jīng)切成較小體積的組織進(jìn)一步分散，使之成為小細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞狀態(tài)的方法。
單層細(xì)胞培養(yǎng)法：將解離得到的細(xì)胞，用培養(yǎng)液制成所需濃度后，接種培養(yǎng)的方法。
懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法：指細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)液中生長(zhǎng)增殖的培養(yǎng)方法。
動(dòng)物細(xì)胞傳代培養(yǎng)：將原代培養(yǎng)細(xì)胞分離、稀釋?zhuān)⒔臃N到新培養(yǎng)器內(nèi)，繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)的過(guò)程。
14、細(xì)胞系：原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功后的細(xì)胞群體，由原代培養(yǎng)物中的各種細(xì)胞組成。
15、有限細(xì)胞系：細(xì)胞系不能繼續(xù)傳代，或傳代數(shù)有限，大多數(shù)二倍體細(xì)胞為有限細(xì)胞系。
16、連續(xù)細(xì)胞系：細(xì)胞系在體外培養(yǎng)時(shí)表現(xiàn)出具有無(wú)限傳代的潛力，也稱(chēng)為無(wú)限細(xì)胞系。
17、細(xì)胞株：通過(guò)選擇或克隆化培養(yǎng)，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的細(xì)胞群。
27、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)用微載體：指直徑在 50 微米到數(shù)百微米不等、適合動(dòng)物細(xì)胞貼附和生長(zhǎng)的微珠。
1、細(xì)胞重組：采用一定方法從活細(xì)胞中分離出細(xì)胞器及其組分，然后在體外將不同細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞器進(jìn)行重組，并組裝成有生物活性的細(xì)胞或細(xì)胞器的一門(mén)技術(shù)。
2、胞質(zhì)體：除去細(xì)胞核后，由膜包裹的無(wú)核細(xì)胞。
3、核體：是與細(xì)胞質(zhì)分離得到的細(xì)胞核，帶有少量細(xì)胞質(zhì)，并圍有質(zhì)膜。
4、微細(xì)胞：由一條或幾條染色體、少量細(xì)胞質(zhì)和完整質(zhì)膜包裹而成。
8、核移植技術(shù)：利用顯微操作等方法，將一個(gè)細(xì)胞的核移植到另一個(gè)細(xì)胞中，或?qū)蓚€(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核（或細(xì)胞質(zhì)）進(jìn)行交換。
3、干細(xì)胞：來(lái)自胚胎、胎兒或成體內(nèi)，具有無(wú)限自我更新和增殖能力以及不同程度分化潛能的一類(lèi)細(xì)胞。
4、胚胎干細(xì)胞：由哺乳動(dòng)物早期胚胎分離克隆出來(lái)的未分化細(xì)胞，能分化為機(jī)體的各種組織細(xì)胞，并具有形成嵌合體的能力。
5、誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞：由已分化的體細(xì)胞誘導(dǎo)而來(lái)，具有類(lèi)似胚胎干細(xì)胞的高度自我更新能力和多向分化潛能的干細(xì)胞。（181）
6、全能干細(xì)胞：可以發(fā)育成一個(gè)完整個(gè)體的干細(xì)胞，一般指哺乳動(dòng)物的受精卵和 8 個(gè)細(xì)胞期以前的卵裂球。
7、亞全能干細(xì)胞：失去了發(fā)育成完整個(gè)體的能力，但仍具有形成內(nèi)、中、外三個(gè)胚層來(lái)源的所有細(xì)胞類(lèi)型潛能的干細(xì)胞。
13、闡述動(dòng)物細(xì)胞工程的應(yīng)用前景。
（1）生物制品生產(chǎn)
①動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)的建立和發(fā)展，大大促進(jìn)了生物活性物質(zhì)、藥品和疫苗的生產(chǎn)。
②基因重組技術(shù)及雜交廇技術(shù)的建立和發(fā)展，促進(jìn)了利用動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)高質(zhì)量、高價(jià)值蛋白。
③單克隆抗體在多種疾病的診斷和治療中得到廣泛應(yīng)用。
（2）動(dòng)物克隆
①采用動(dòng)物胚胎細(xì)胞和體細(xì)胞核移植技術(shù)，成功克隆多種動(dòng)物。
②動(dòng)物克隆技術(shù)開(kāi)發(fā)了動(dòng)物繁殖等領(lǐng)域新途徑。
③治療性克隆也得到廣泛應(yīng)用。
（3）干細(xì)胞技術(shù)
①干細(xì)胞體外培養(yǎng)將造福人類(lèi)。
②細(xì)胞治療和組織工程。
③藥物篩選。
④成體干細(xì)胞可塑性的發(fā)現(xiàn)。
13、簡(jiǎn)述血清對(duì)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的作用。
①豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；②促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖；③細(xì)胞貼附；④細(xì)胞保護(hù)；⑤培養(yǎng)基緩沖
30、闡述無(wú)血清培養(yǎng)基的主要種類(lèi)和補(bǔ)充成分。
（1）無(wú)血清培養(yǎng)基的主要種類(lèi)
①一般意義上的無(wú)血清培養(yǎng)基
②無(wú)動(dòng)物來(lái)源培養(yǎng)基
③無(wú)動(dòng)物蛋白培養(yǎng)基
④化學(xué)組分限定培養(yǎng)基
（2）無(wú)血清培養(yǎng)基的補(bǔ)充成分。①激素和生長(zhǎng)因子
②結(jié)合蛋白
③貼壁成分
④微量元素和低分子量營(yíng)養(yǎng)成分
⑤酶抑制劑
12、簡(jiǎn)述動(dòng)物懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法的一般步驟。
①分散細(xì)胞團(tuán)塊；②計(jì)數(shù)細(xì)胞；③加入培養(yǎng)液；④接種細(xì)胞；⑤培養(yǎng)細(xì)胞
23、簡(jiǎn)述適合動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的生物反應(yīng)器應(yīng)具備的條件。
①混合系統(tǒng)設(shè)計(jì)良好；②反應(yīng)器內(nèi)空間利用率高；③能?chē)?yán)格保證無(wú)菌環(huán)境；④能精確控制；
⑤便于觀察和采樣
28、簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞微載體培養(yǎng)系統(tǒng)的特點(diǎn)。
①細(xì)胞產(chǎn)率高；②易于控制；③易于分離、收獲細(xì)胞；④反應(yīng)器改進(jìn)容易；⑤適合多種貼壁
細(xì)胞培養(yǎng)
29、簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞微載體培養(yǎng)系統(tǒng)的缺點(diǎn)。
①易受剪切損傷；②價(jià)格貴；③需要較高的接種細(xì)胞量；④老化后易脫落；⑤需要加入血清
45、闡述微載體動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的主要步驟。
①微載體的選擇。主要根據(jù)所用細(xì)胞種類(lèi)和培養(yǎng)目的來(lái)進(jìn)行。
②微載體浸泡。使微載體水化膨脹。
③微載體消毒。常用高壓蒸汽滅菌。
④接種。應(yīng)該使用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、分散的單細(xì)胞。
⑤培養(yǎng)。在培養(yǎng)器內(nèi)加入培養(yǎng)液、微小球和細(xì)胞。
⑥觀察。培養(yǎng)液開(kāi)始呈酸性時(shí)，需要換液，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
⑦細(xì)胞計(jì)數(shù)。采用消化法后計(jì)數(shù)。
⑧傳代培養(yǎng)。消化化后進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
⑨分離細(xì)胞與收獲。通常采用酶消化法，分離細(xì)胞一般采用離心法.46、闡述大規(guī)模動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用和存在的問(wèn)題。
（1）應(yīng)用。①主要生產(chǎn)有重要價(jià)值的產(chǎn)品，已經(jīng)成為生物醫(yī)藥高技術(shù)產(chǎn)業(yè)的重要部分。
②主要產(chǎn)品有疫苗、干擾素、單克隆抗體、基因重組產(chǎn)品等。
（2）存在的問(wèn)題
①細(xì)胞密度和產(chǎn)物濃度低。
②長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞分泌產(chǎn)物能力易丟失。
③長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)時(shí)，產(chǎn)物活性易降低。
④培養(yǎng)成本高。
⑤對(duì)細(xì)胞代謝和生長(zhǎng)特性的基礎(chǔ)研究比較欠缺。
⑥在線監(jiān)測(cè)技術(shù)不完善。
3、簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞化學(xué)誘導(dǎo)融合優(yōu)勢(shì)。
①來(lái)源方便；②使用簡(jiǎn)便；③不需要特殊儀器設(shè)備；④融合效率高
6、簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞融合后融合細(xì)胞的篩選方法。
①基于酶缺陷型細(xì)胞和藥物抗性的雜交篩選；
②基于營(yíng)養(yǎng)缺陷型細(xì)胞所建立的雜交篩選；
③由溫度敏感突變型細(xì)胞所建立的雜交篩選；
④應(yīng)用熒光激活細(xì)胞分選儀進(jìn)雜交細(xì)胞篩選
7、簡(jiǎn)述單克隆抗體的技術(shù)流程。
①親本選擇；②細(xì)胞融合；③雜交細(xì)胞的篩選；④克隆培養(yǎng)；⑤單克隆抗體生產(chǎn)
8、簡(jiǎn)述單克隆抗體制備過(guò)程中細(xì)胞融合的步驟。
①脾細(xì)胞和鼠骨髓瘤細(xì)胞的混合；②逐滴加入 peg；③終止 peg 作用；④用 hat 懸浮細(xì)胞；
⑤分裝融合細(xì)胞
11、簡(jiǎn)述影響胞質(zhì)體制備的因素
①細(xì)胞密度；②細(xì)胞松弛素劑量；③離心溫度；④離心速度；⑤離心時(shí)間
15、簡(jiǎn)述核移植的一般操作程序。
①核受體和核供體的制備；②核移植；③重組胚的活化；④培養(yǎng)；⑤胚胎移植
16、簡(jiǎn)述核供體細(xì)胞對(duì)核移植效率的影響因素。
①細(xì)胞周期；②細(xì)胞類(lèi)型；③細(xì)胞分化程度；④傳代次數(shù)；⑤供體動(dòng)物年齡
23、簡(jiǎn)述動(dòng)物克隆技術(shù)中存在的問(wèn)題。
①成功率低②克隆動(dòng)物的遺傳問(wèn)題；③可應(yīng)用性；④技術(shù)不成熟⑤基礎(chǔ)理論研究還很薄弱
24、闡述核移植的一般操作程序。
①核受體細(xì)胞的制備。大多采用去核的 mⅱ 期卵母細(xì)胞為受體。
②核供體細(xì)胞的制備。核供體細(xì)胞應(yīng)該是完整的二倍體、基因組，能正常發(fā)育。
③細(xì)胞核移植。常用胞質(zhì)內(nèi)注射和透明帶下注射兩種方法。
④重組胚的活化。一般重組胚電融合時(shí)所施加的電脈沖在誘導(dǎo)融合時(shí)，具有激活重組胚的作用。
⑤重組胚的培養(yǎng)。有體內(nèi)和體外培養(yǎng)兩種方式。
⑥重組胚的胚胎移植。胚胎移植后的妊娠率和產(chǎn)仔率是判斷移植效率的最終標(biāo)準(zhǔn)。
⑦核移植后代的鑒定。一般從形態(tài)、性別上鑒定，還可采用分子生物學(xué)技術(shù)鑒定。
25、闡述動(dòng)物克隆技術(shù)的意義及存在的問(wèn)題。
（1）動(dòng)克隆技術(shù)的意義
①促進(jìn)生物學(xué)基礎(chǔ)問(wèn)題的研究 ②加速良種繁育，保護(hù)瀕危動(dòng)物 ③培育轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物，生產(chǎn)生物藥物 ④與基因和干細(xì)胞技術(shù)結(jié)合，開(kāi)展治療性克隆
（2）動(dòng)物克隆技術(shù)中存在的問(wèn)題
①成功率低②克隆動(dòng)物的遺傳問(wèn)題③可應(yīng)用性④技術(shù)不成熟⑤基礎(chǔ)理論研究還很薄弱
18、簡(jiǎn)述胚胎干細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征。
①細(xì)胞體積小；②核大；③核質(zhì)比例高；④核仁明顯；⑤體外培養(yǎng)呈集落狀生長(zhǎng)
19、簡(jiǎn)述用于胚胎干細(xì)胞鑒定的分子特征。
①堿性磷酸酶（akp）；②轉(zhuǎn)錄因子 oct-4；③端粒酶；④階段性特異性胚胎細(xì)胞表面抗原（ssea）
20、簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞分離純化的常用技術(shù)。
①利用細(xì)胞體積；②利用細(xì)胞密度；③選擇性細(xì)胞凝集；④基于不同黏附特性；⑤利用細(xì)胞
表面標(biāo)志
簡(jiǎn)述誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞（ips）的應(yīng)用前景。
①細(xì)胞核重編程機(jī)制的研究；②臨床醫(yī)學(xué)研究；③新藥研發(fā)及篩選；④其他物種 ips 細(xì)胞的建立
28、闡述干細(xì)胞的概念、干細(xì)胞的分類(lèi)和生物學(xué)特點(diǎn)。
（1）干細(xì)胞是指來(lái)自胚胎、胎兒或成體內(nèi)，具有無(wú)限自我更新和增殖能力以及不同程度分
化潛能的一類(lèi)細(xì)胞。
（2）干細(xì)胞的分類(lèi)
①根據(jù)來(lái)源分為胚胎干細(xì)胞、成體干細(xì)胞和誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞。
②根據(jù)分化潛能分為全能干細(xì)胞、亞全能干細(xì)胞、多能干細(xì)胞和單能干細(xì)胞
（3）干細(xì)胞的生物學(xué)特點(diǎn)有：
①自我更新能力。指分裂后子代干細(xì)胞能保持與自己相同的基因型與表型，維持未分化狀
態(tài)并具有相同的分化潛能。
②分化能力。指分裂后轉(zhuǎn)變?yōu)樾螒B(tài)、機(jī)能、化學(xué)構(gòu)成上與自己相異的子代細(xì)胞。
③增殖能力。指通過(guò)細(xì)胞有絲分裂實(shí)現(xiàn)細(xì)胞數(shù)量的擴(kuò)增。
29、闡述胚胎干細(xì)胞的應(yīng)用前景和存在問(wèn)題。
胚胎干細(xì)胞：由哺乳動(dòng)物早期胚胎分離克隆出來(lái)的未分化細(xì)胞，能分化為機(jī)體的各種組織細(xì)
胞，并具有形成嵌合體的能力。
（1）胚胎干細(xì)胞的應(yīng)用前景
①探討胚胎發(fā)育的調(diào)控機(jī)制。②臨床應(yīng)用?？捎糜谂R床細(xì)胞、組織和器官的修復(fù)和移植治療，建立動(dòng)物模型等。③建立藥物篩選和研究平臺(tái) ④動(dòng)物克隆及改良
（2）存在的問(wèn)題
①維持胚胎干細(xì)胞未分化狀態(tài)的機(jī)制及定向誘導(dǎo)分化的調(diào)控機(jī)制尚不清楚。②臨床治療存在安全性問(wèn)題 ③器官克隆與移植仍有待于技術(shù)上的突破。④面臨倫理、宗教和社會(huì)學(xué)問(wèn)題
30、闡述什么是組織工程及理想種子細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)。
組織工程：是將細(xì)胞工程和材料科學(xué)相結(jié)合，利用具有較好生物相容性的材料，按缺損組織
或器官的結(jié)構(gòu)要求制成模型或支架放在體外培養(yǎng)系統(tǒng)中，使細(xì)胞沿著模型或支架不斷生長(zhǎng)擴(kuò)
增，構(gòu)建成新的組織、器官。
理想種子細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)主要包括：
①來(lái)源廣，數(shù)量充足 ②容易培養(yǎng)，黏附力大，增殖力強(qiáng)，可大量擴(kuò)增 ③遺傳背景穩(wěn)定，具備特定的生物學(xué)功能 ④純度高，具有特定功能的細(xì)胞占主導(dǎo) ⑤免疫排斥反應(yīng)極小或無(wú)免疫排斥反應(yīng) ⑥分子結(jié)構(gòu)和功能與再生組織的正常細(xì)胞相似⑦臨床上易取得，供體損傷小，具有實(shí)用性 ⑧植入體內(nèi)能高質(zhì)量地修復(fù)組織并能保持良好的遠(yuǎn)期效果
暨南大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)真題篇二
1.體外培養(yǎng)的細(xì)胞按生長(zhǎng)方式可分為哪二種? 按細(xì)胞在體外生長(zhǎng)的形態(tài)特征,可分為哪幾種常見(jiàn)類(lèi)型? ⑴按生長(zhǎng)方式分為二型：
粘附型細(xì)胞:附著在某一固相支持物表面才能生長(zhǎng)的細(xì)胞。
懸浮型細(xì)胞:不必附著于固相支持物表面，而在懸浮狀態(tài)下即可生長(zhǎng)的細(xì)胞。（絕大多數(shù)有機(jī)體細(xì)胞屬粘附型細(xì)胞。）
⑵可分四型：(1)上皮型細(xì)胞(2)成纖維型細(xì)胞(3)游走型細(xì)胞(4)多形型細(xì)胞 2.簡(jiǎn)述體外培養(yǎng)細(xì)胞的整個(gè)生命活動(dòng)過(guò)程的分期及每代貼附生長(zhǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程 ⑴通常，體外培養(yǎng)細(xì)胞的全部生命期大致可被分為以下三個(gè)階段：
①原代培養(yǎng)期：也稱(chēng)初代培養(yǎng)，是指從機(jī)體中取出細(xì)胞接種培養(yǎng)到第一次傳代之前的這一階段。此期的細(xì)胞呈現(xiàn)出活躍移動(dòng)的特點(diǎn)，可見(jiàn)細(xì)胞分裂，但不旺盛。處于原代培養(yǎng)階段的細(xì)胞與體內(nèi)原組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上有很大的相似性。細(xì)胞群具有明顯的異質(zhì)性，細(xì)胞間的相互依存性強(qiáng)，在軟瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞集落形成率很低。②．傳代期 ：通常是培養(yǎng)細(xì)胞全生命期中持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)的時(shí)期，原代培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)傳代后常被稱(chēng)做細(xì)胞系。一般情況下，正常體細(xì)胞在傳代10-50次左右后，細(xì)胞分裂的能力就會(huì)逐漸減弱，甚至完全喪失，細(xì)胞便進(jìn)入衰退期。
③衰退期：處于衰退期的培養(yǎng)細(xì)胞，增殖速率已經(jīng)變得很慢或不再增殖，直至最后衰退死亡。
以上特點(diǎn)，主要是針對(duì)體外培養(yǎng)的機(jī)體正常細(xì)胞，對(duì)于體外發(fā)生轉(zhuǎn)化的細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞而言，永生性或惡型性的獲得使得這類(lèi)細(xì)胞獲得持久性的增殖能力，這樣的細(xì)胞群體常被稱(chēng)為無(wú)限細(xì)胞系或連續(xù)細(xì)胞系。
⑵每代貼附生長(zhǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程：①游離期：細(xì)胞接種后在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)，也稱(chēng)懸浮期。此時(shí)細(xì)胞質(zhì)回縮，胞體呈圓球形。時(shí)間：10分鐘一4小時(shí)②貼壁期：細(xì)胞附著于底物上，游離期結(jié)束。底物：玻璃、塑料、膠原、其它細(xì)胞等③潛伏期：此時(shí)細(xì)胞有生長(zhǎng)活動(dòng)，而無(wú)細(xì)胞分裂。細(xì)胞株潛伏期一般為6～24小時(shí)。④對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期：細(xì)胞數(shù)隨時(shí)間變化成倍增長(zhǎng)，活力最佳，最適合進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。⑤停止期（平臺(tái)期）：細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶壁后，細(xì)胞雖有活力但不再分裂 機(jī)制：接觸抑制、密度限制 3.簡(jiǎn)述體外培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)生存環(huán)境的基本要求.⑴細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)需要：①基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)： 氨基酸（１２種＋谷氨酰胺）、維生素、葡萄糖、核糖、脫氧核糖等無(wú)機(jī)離子。②促細(xì)胞生長(zhǎng)因子：多由血清提供
⑵細(xì)胞的生存環(huán)境：①溫度條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響：不同生物來(lái)源的組織細(xì)胞培養(yǎng)溫度不同；體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞最常用的溫度是37℃，耐低溫不耐高溫。在生理溫度范圍內(nèi)，溫度與細(xì)胞生長(zhǎng)率之間存在正相關(guān)關(guān)系。②氣相環(huán)境對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的氣相環(huán)境都是采用5%co2與95%空氣（提供氧）的混合氣體。ｏ2參與細(xì)胞的能量代謝過(guò)程，ｃｏ2用于維持培養(yǎng)液的酸堿度，一般多為開(kāi)放式培養(yǎng) ③培養(yǎng)液的酸堿度對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響：大多數(shù)的有機(jī)體細(xì)胞能在ph6.0～8.0的環(huán)境中生存。最適宜的ph值范圍是7.2～7.4。體外培養(yǎng)的正常細(xì)胞耐酸能力要強(qiáng)于耐堿能力④無(wú)污染、無(wú)毒。
4．什么是細(xì)胞培養(yǎng)用液,主要分為哪幾類(lèi)? ⑴培養(yǎng)用液是維護(hù)組織細(xì)胞生存、生長(zhǎng)及進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)各項(xiàng)操作過(guò)程中所需的基本溶液。⑵主要包括：平衡鹽溶液 ；
培養(yǎng)基；
其他培養(yǎng)用液。5．d-hank’s與hank’s的主要區(qū)別是什么? d-hank’s不含有ca2+、mg2+，常用于配制胰酶溶液。6．簡(jiǎn)述胰酶的常用濃度及配制時(shí)的注意事項(xiàng)。
胰酶(trypsin)溶液： 濃度一般為0.1％～0.25％，配制時(shí)要用不含ca2+、mg2+及血清的平衡鹽溶液。
7.細(xì)胞培養(yǎng)中血清的主要作用？
(1)提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) ；(2)提供貼壁和擴(kuò)展因子(3)提供激素及各種生長(zhǎng)因子；(4)提供結(jié)合蛋白(5)對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞提供某些保護(hù)作用 8.血清的使用與儲(chǔ)存有哪些注意事項(xiàng)？
（1）使用前的處理：使用前通常在56℃加熱30分鐘，這一過(guò)程稱(chēng)為滅活。熱滅活目的：滅活血清中的補(bǔ)體成分。對(duì)于一些品質(zhì)高的胎牛血清和新生牛血清可以考慮不經(jīng)滅活直接用于細(xì)胞培養(yǎng)。
（2）儲(chǔ)存條件：血清一般儲(chǔ)存于－20℃,同時(shí)應(yīng)避免反復(fù)凍融。大包裝的血清，首先將血清滅活處理，然后分裝為小包裝，如10ml、20ml、50ml，儲(chǔ)存于-20℃，使用前融化。融化后的血清在4℃不宜長(zhǎng)時(shí)間存放，應(yīng)盡快使用。9.簡(jiǎn)述干粉培養(yǎng)基的配制過(guò)程。
dmem培養(yǎng)液的配制（舉例）： ⑴900 ml ddh2o于1000 ml燒杯中，將dmem粉1包倒入其中，盛粉袋用50 ml ddh2o分次沖洗，也倒入容器，磁力（或玻棒）攪拌溶解。⑵用5％－10％的nahco3調(diào)ph至7.2。⑶加青、鏈霉素至終濃度100u/ml 和100ug/ml ⑷用0.22um的濾膜過(guò)濾除菌。⑸分裝（200 ml左右）后4℃冰箱保存。
10.細(xì)胞培養(yǎng)工作室可分為那幾個(gè)部分，各有什么作用? 一般包括：準(zhǔn)備室、培養(yǎng)室和緩沖室。作用：⑴準(zhǔn)備室：用于進(jìn)行培養(yǎng)器皿的清洗、包裝、培養(yǎng)物質(zhì)的準(zhǔn)備和消毒以及供應(yīng)物品的保藏等。⑵培養(yǎng)室：用于進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)和各種無(wú)菌操作的實(shí)驗(yàn)室。其基本條件是：清潔、無(wú)菌、干燥、不通風(fēng)，并具有適宜的光線。天花板不宜高過(guò)2.5m。⑶緩沖室：（更衣室）2培養(yǎng)箱的作用及使用中的注意事項(xiàng)。
用于維持適當(dāng)溫度、濕度與ph。注意事項(xiàng)：⑴質(zhì)量關(guān)鍵在控溫裝置，溫度變化一般不應(yīng)超過(guò)0.5度;培養(yǎng)箱的溫度設(shè)在35～37℃，這是人和哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞的最適溫度。⑵培養(yǎng)容器需與外界保持通氣狀態(tài)。⑶箱內(nèi)空氣應(yīng)保持干凈，定期消毒（紫外燈、酒精）⑷水槽:保持一定濕度
12.試述清潔液的配方組成及配制時(shí)的注意事項(xiàng)。
⑴清潔液 :重鉻酸鉀（g）濃硫酸（ml）蒸餾水（ml），強(qiáng)清潔液
63∶1000∶200，次強(qiáng)清洗液
120∶ 200∶1000，弱清潔液
100∶ 100∶1000 ⑵配制時(shí)應(yīng)注意安全，須穿戴耐酸手套和圍裙，并要保護(hù)好面部及身體裸露部分。配制過(guò)程中可使重鉻酸鉀溶于水中，然后慢慢加濃硫酸，并不停的用玻璃棒攪拌，使產(chǎn)生的熱量揮發(fā)，配制溶液應(yīng)選擇塑料制品。配成后清潔液一般為棕紅色 13．簡(jiǎn)述消毒滅菌的常用方法、要求條件及主要應(yīng)用范圍。⑴物理消毒滅菌法
①紫外線：用于空氣，操作臺(tái)表面和不能使用其它法進(jìn)行消毒的培養(yǎng)器皿。消毒時(shí)間：30min（至少）； 紫外殺菌功能除了紫外本身以外，還可以由產(chǎn)生的臭氧來(lái)完成。紫外滅菌以后，最好過(guò)一個(gè)小時(shí)再進(jìn)去。②過(guò)濾：0.22μm（適用于液體）③濕熱（高壓蒸氣滅菌法）15磅,121℃，20min 各種物品有效消毒壓力和時(shí)間不同，一般要求如下：
培養(yǎng)用液、橡膠制品
l0磅l0分鐘
布類(lèi)、玻璃制品、金屬器械等
15磅20分鐘
④干烤：160℃, 2 小時(shí)（適用于玻璃器皿等）注意：消毒后不要立即打開(kāi)箱門(mén)，以防冷空氣驟然進(jìn)入引起玻璃炸裂，影響消毒效果。
⑵化學(xué)消毒滅菌法：①7５%酒精
主要用于操作者的皮膚，操作臺(tái)表面及無(wú)菌室內(nèi)的壁面處理。②1－２‰新潔爾滅
主要用于器械的浸泡及皮膚和操作室壁面的擦試消毒。③抗生素
主要用于培養(yǎng)用液滅菌或預(yù)防培養(yǎng)物污染。細(xì)胞培養(yǎng)中最常用的抗生素是青霉素（常用濃度是100u/ml）與鏈霉素（100μg/ml）。不要在原代培養(yǎng)中加入抗生素。
14.如何對(duì)玻璃器皿進(jìn)行有效清洗？
玻璃器皿的清洗：浸泡—刷洗(+烘干)—浸酸—沖洗；清洗后的玻璃器皿：干凈透明無(wú)油跡。⑴浸泡： ①初次使用和培養(yǎng)使用后的玻璃器皿均需先用清水浸泡，以使附著物軟化或被溶掉。②新的初次使用的玻璃器皿，在生產(chǎn)及運(yùn)輸過(guò)程中，玻璃表面帶有大量的干固的灰塵，且玻璃表面常呈堿性及帶有一些對(duì)細(xì)胞有害的物質(zhì)等。先用自來(lái)水簡(jiǎn)單刷洗，然后用5％稀鹽酸液浸泡過(guò)夜，以中和其中的堿性物質(zhì)。③再次使用的玻璃器皿則常附有大量剛使用過(guò)的殘留蛋白質(zhì)，干固后不易洗掉，用后立即浸入水中，要求完全浸入，不能留有氣泡或浮在液面上。⑵刷洗：用毛刷（特制的羊毛刷）沾洗滌劑刷洗，以除去器皿表面附著較牢的雜質(zhì)。刷洗要適度，過(guò)度會(huì)損害器皿表面光澤度。自然晾干或烘干后泡酸。⑶浸酸：玻璃器皿浸泡到清潔液（洗液）中。清潔液對(duì)玻璃器皿無(wú)腐蝕作用，而其強(qiáng)氧化作用可除掉刷洗不掉的微量雜質(zhì)。浸泡時(shí)器皿要充滿清潔液，勿留氣泡或器皿露出清潔液面。浸泡時(shí)間：一般為過(guò)夜，不應(yīng)少于6 小時(shí)。⑷沖洗：在使用后，刷洗及浸泡后都必須用水充分沖洗,使之盡量不留污染或清潔液的殘 跡。最好用洗滌裝置。如用手工操作，需流水沖洗十次以上，每次水須灌滿及倒干凈，然后用蒸餾水清洗3-5 次，晾干（或烘干）備用 15．細(xì)胞培養(yǎng)中最常用的抗生素及使用濃度是什么? 青霉素（常用濃度是100u/ml）與鏈霉素（100μg/ml）。
16．什么是原代培養(yǎng)？簡(jiǎn)述原代培養(yǎng)方法的分類(lèi)及主要操作步驟。
⑴原代培養(yǎng)：取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長(zhǎng)的細(xì)胞在傳代之前稱(chēng)原代培養(yǎng)。⑵原代培養(yǎng)方法分類(lèi)：貼塊法和消化法。消化法又分為冷消化與熱消化；一次性消化與分次消化。主要步驟：
貼塊法：將取得洗凈并剔去多余成分的組織切成約1mm3大小的植塊，用于植塊培養(yǎng)。消化法：將取得洗凈并剔去多余成分的組織剪碎——蛋白酶溶液消化——機(jī)械方吹打組織塊—對(duì)濾過(guò)液離心（<1000r/min, <10min）——用培養(yǎng)液懸浮成細(xì)胞懸液——計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞密度——用于分離細(xì)胞培養(yǎng)
17．何謂傳代培養(yǎng)？簡(jiǎn)述貼壁細(xì)胞的傳代操作步驟。
⑴傳代培養(yǎng)是指細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶以1：2或其他比率轉(zhuǎn)移，接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。⑵貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)： ①選取生長(zhǎng)良好的細(xì)胞，在超凈工作臺(tái)的酒精燈旁，倒去瓶中的舊培養(yǎng)液，加入2～3ml的d-hanks液，輕輕振蕩漂洗細(xì)胞，以除去懸浮在細(xì)胞表面的碎片。②加入適量0.１％－ 0.25％胰蛋白酶消化液，室溫消化，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞單層收縮突起出現(xiàn)空隙時(shí)，倒去酶液。③用hanks液洗滌1次，加入適量培養(yǎng)液，反復(fù)吹打細(xì)胞，使其成細(xì)胞懸液。④以1：2或1：3進(jìn)行分裝，并在培養(yǎng)瓶上做好標(biāo)記，注明代號(hào)、日期，輕輕搖勻，37 ℃co2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。⑤觀察：細(xì)胞培養(yǎng)24h后，即可觀察培養(yǎng)液的顏色及細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。18．收集細(xì)胞時(shí)一般常用的轉(zhuǎn)速和時(shí)間是多少？ 轉(zhuǎn)速：1000r/min；時(shí)間：5min
19.什么是冷凍保存？影響細(xì)胞冷凍保存效果的因素有哪些？
⑴冷凍保存(cryopreservation)：將體外培養(yǎng)物懸浮在加有冷凍保護(hù)劑的溶液中，以一定的冷凍速率降至零下某一溫度(一般是低于-70℃的超低溫條件)，并在此溫度下對(duì)其長(zhǎng)期保存的過(guò)程。⑵①冷凍速率當(dāng)冷凍速度過(guò)慢時(shí)，細(xì)胞脫水嚴(yán)重，細(xì)胞體積嚴(yán)重收縮，超過(guò)一定程度時(shí)即失去活性。冷凍速度過(guò)慢，還會(huì)引起細(xì)胞外溶液部分結(jié)冰，從而使細(xì)胞外未結(jié)冰的溶液中溶質(zhì)濃度增高，產(chǎn)生溶質(zhì)損傷。
當(dāng)冷凍速度過(guò)快時(shí)，細(xì)胞內(nèi)水分來(lái)不及外滲，會(huì)形成較大冰晶,造成細(xì)胞膜及細(xì)胞器的破壞，產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)冰晶損傷。②冷凍保存溫度：液氮溫度(-196℃)是目前最佳冷凍保存溫度。應(yīng)用-70℃～-80℃條件冷凍保存細(xì)胞，短期內(nèi)對(duì)細(xì)胞活性無(wú)明顯影響，但隨著凍存時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞存活率明顯下降。③復(fù)溫速率 指在細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)溫度升高的速度。一般來(lái)說(shuō)復(fù)溫速度越快越好。常規(guī)的做法是，在37℃水浴中，于1～2min內(nèi)完成復(fù)溫。在冷凍復(fù)蘇中遵循：慢凍速溶原則。④冷凍保護(hù)劑：是指可以保護(hù)細(xì)胞免受冷凍損傷的物質(zhì)。
分為：滲透性：
常用甘油、dmso
非滲透性
甘油或二甲基亞砜這兩種物質(zhì)分子量小，溶解度大，易穿透細(xì)胞，可以使冰點(diǎn)下降，提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，且對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性。
保護(hù)機(jī)制：是在細(xì)胞冷凍懸液完全凝固之前，滲透到細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生一定的摩爾濃度，降低細(xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度，從而保護(hù)細(xì)胞免受高濃度電解質(zhì)的損傷；同時(shí)，細(xì)胞內(nèi)水分也不會(huì)過(guò)分外滲，避免了細(xì)胞過(guò)分脫水皺縮。甘油和dmso并不能防止細(xì)胞內(nèi)結(jié)冰。在使用該類(lèi)冷凍保護(hù)劑時(shí)，需要一定的時(shí)間進(jìn)行預(yù)冷，讓甘油或dmso等充分滲到細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞內(nèi)外達(dá)到平衡以起到充分的保護(hù)作用。目前，dmso的應(yīng)用比甘油更為廣泛。
非滲透性冷凍保護(hù)劑不能滲透到細(xì)胞內(nèi)，一般是些大分子物質(zhì)。20．凍存的細(xì)胞一般如何復(fù)蘇？
1)將恒溫水浴箱的溫度調(diào)至37～40℃。2)從液氮中取出凍存小管，立即投入37～40℃溫水中快速晃動(dòng)，直至凍存液完全融解。要在1～2min內(nèi)完成復(fù)溫。3)將細(xì)胞凍存懸液移入離心管，加入約5m1培養(yǎng)液，輕輕吹勻。4)將細(xì)胞懸液經(jīng)800～1000 r/min離心5min。棄上清液。5)給細(xì)胞沉淀物加入完全培養(yǎng)液，輕輕吹吸均勻。將細(xì)胞懸液移入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加足培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)。21．簡(jiǎn)述培養(yǎng)細(xì)胞的非玻璃化凍存過(guò)程。
非玻璃化凍存——是利用各種溫級(jí)的冰箱分階段降溫至-70～-80℃，然后投入液氮進(jìn)行保存；該種方法凍結(jié)的細(xì)胞懸液或多或少都有冰晶的形成。
凍存過(guò)程：(1)待凍存細(xì)胞懸液的準(zhǔn)備 ：①按常規(guī)方法消化處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞培養(yǎng)物,制備成單細(xì)胞懸液,計(jì)算細(xì)胞總數(shù)。②將細(xì)胞懸液以800～1000r／min離心5min，棄上清液。③向沉淀物中加入冷凍液。輕輕吹吸均勻，使細(xì)胞密度達(dá)1×106～1×107個(gè)/ml。④按每管1～1.5ml的量，分裝于凍存小管內(nèi)。擰緊管蓋。⑤在凍存小管上做標(biāo)記，包括細(xì)胞代號(hào)及凍存日期。
(2)分級(jí)冷凍：①先將凍存小管放人普通冰箱冷藏層(4～8℃)，約40min。②接著置于普通冰箱冷凍層(-10～-20℃)，30～60min。③再于-30℃放置30min左右（可省略）。④然后在-70～-80℃下過(guò)夜。⑤最后將凍存小管投入液氮保存。還有一種簡(jiǎn)單的方法，就是將凍存小管先懸掛在液氮罐口20 min，再直接投入液氮中保存。第三種方法是，用4℃預(yù)冷的冷凍保護(hù)液懸浮細(xì)胞，分裝凍存小管后，將凍存小管放在4℃下30min；然后置于壁厚1 cm以上的泡沫塑料小盒內(nèi)封好，立刻將小盒放置在-70～-80℃冰箱中24h以上至1周；再將凍存小管投入液氮中保存。
(3)記錄：做好凍存記錄。記錄內(nèi)容包括凍存日期、細(xì)胞代號(hào)、凍存管數(shù)、凍存過(guò)程中降溫的情況、凍存位置以及凍存經(jīng)手人。22．dmso使用時(shí)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？
⑴在使用dmso前，不需要對(duì)其進(jìn)行高壓滅菌，因其本身有滅菌作用。⑵在常溫下，dmso對(duì)人體有毒，故在配制冷凍保護(hù)劑時(shí)最好帶手套。
⑶由于許多冷凍保護(hù)劑(如dmso))在低溫條件下能保護(hù)細(xì)胞，但在常溫下卻對(duì)細(xì)胞有害，故在細(xì)胞復(fù)溫融解后要及時(shí)洗除冷凍保護(hù)劑。23.細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)有哪些微生物污染，有何主要特征？
⑴真菌污染：真菌種類(lèi)多，形態(tài)各異，但污染后均不難發(fā)現(xiàn)，大多呈白色或淺黃色小點(diǎn)漂浮于培養(yǎng)液表面，肉眼可見(jiàn)；有的散在生長(zhǎng)，鏡下觀察呈絲狀、管狀或樹(shù)枝狀菌絲，縱橫交錯(cuò)穿行于細(xì)胞之間。念珠菌和酵母菌呈卵圓形態(tài)，散在于細(xì)胞周邊和細(xì)胞之間生長(zhǎng)。⑵細(xì)菌污染：污染后大多能改變培養(yǎng)液ph培養(yǎng)液變混濁，毒性大的細(xì)菌很快導(dǎo)致細(xì)胞崩解死亡。加用抗生素的培養(yǎng)用液一般可預(yù)防和排除個(gè)別少量細(xì)菌的污染。⑶支原體污染：支原體是細(xì)胞培養(yǎng)中最常見(jiàn)、不易被察覺(jué)和干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一種污染。24．運(yùn)送細(xì)胞的比較簡(jiǎn)便的方法是哪一種，簡(jiǎn)述其過(guò)程。
⑴一是用液氮或干冰保存運(yùn)輸，效果較好，但需用特制容器如小液氮罐等，又因液氮和干冰蒸發(fā)均較快，適于空運(yùn)，比較麻煩;二是充液法運(yùn)輸，比較簡(jiǎn)便。
⑵充液法運(yùn)輸操作如下： ①選生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞，待達(dá)80%或90%匯合時(shí)，去掉舊培養(yǎng)液換入新培養(yǎng)液，量要達(dá)到培養(yǎng)瓶的頸部(過(guò)滿易污染)，保留少許空間，塞緊瓶塞，空氣過(guò)多運(yùn)輸中氣泡運(yùn)動(dòng)易使細(xì)胞脫落;②妥善包裝和運(yùn)送；一般在不超過(guò)四五天到達(dá)目的地的情況下，對(duì)細(xì)胞活力無(wú)嚴(yán)重影響;③到達(dá)后，倒出大部分培養(yǎng)液，保留正常量，置37℃培養(yǎng)，次日傳代。25.簡(jiǎn)述細(xì)胞污染的概念及種類(lèi).⑴細(xì)胞污染: 凡混入培養(yǎng)環(huán)境中對(duì)細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物，都視為污染。⑵組織培養(yǎng)污染: 微生物：真菌、細(xì)菌、支原體和病毒；化學(xué)物質(zhì)：影響細(xì)胞生存的非細(xì)胞所需的化學(xué)成分；細(xì)胞：不同細(xì)胞類(lèi)型的交叉污染。
26.細(xì)胞培養(yǎng)中污染主要通過(guò)哪些途徑，一般如何預(yù)防？
⑴空氣: 培養(yǎng)設(shè)施不宜置于通風(fēng)場(chǎng)所；定期清理凈化工作臺(tái)的過(guò)濾層，防止阻塞；操作中應(yīng)減少空氣流動(dòng)；帶口罩；夏季潮濕季節(jié)空氣中含菌數(shù)量多，每立方米內(nèi)含菌數(shù)不應(yīng)超過(guò)1～5個(gè)。⑵清洗消毒：培養(yǎng)器皿和容器洗刷不凈殘留污物、培養(yǎng)用液滅菌不徹底等，都可引入有害物。⑶操作：實(shí)驗(yàn)操作馬虎、動(dòng)作不準(zhǔn)確、消毒觀念不強(qiáng)，使用的吸管、刀、剪沾染微生物等；或封瓶口時(shí)不嚴(yán)，都可發(fā)生污染。同時(shí)培養(yǎng)兩種以上細(xì)胞，操作不慎使用同一吸管或培養(yǎng)用液，可能導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。⑷血清：血清也是污染細(xì)胞的來(lái)源，有的市售血清制備水平低、檢測(cè)不嚴(yán)，常已被支原體和病毒污染。⑸組織：初代培養(yǎng)組織常有污染；有的是在手術(shù)中污染，有的本身可能是被污染的組織(如已發(fā)生潰爛的腫瘤組織)；手術(shù)用碘酒消毒后，擦拭不凈可能混入碘污染。
27． 細(xì)胞計(jì)數(shù)的操作要領(lǐng)及計(jì)算公式是什么？
⑴具體操作程序如下：①取血細(xì)胞計(jì)數(shù)板和蓋玻片，用75%酒精擦凈。將蓋玻片放于計(jì)數(shù)板上。②用滴管取混合均勻的細(xì)胞懸液，滴入計(jì)數(shù)室內(nèi)。要保證蓋片下充滿懸液，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓?xiě)乙毫魅肱赃叢壑小５渭蛹?xì)胞懸液后約靜置1分鐘后則可以進(jìn)行計(jì)數(shù)。③統(tǒng)計(jì)四個(gè)大格的細(xì)胞數(shù)：將血球計(jì)數(shù)板放于顯微鏡的低倍鏡下觀察，并移動(dòng)計(jì)數(shù)板，分別數(shù)出四角的四個(gè)大格（每個(gè)大格含有16個(gè)中格）中的細(xì)胞數(shù)。對(duì)壓邊線細(xì)胞：計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右
⑵計(jì)算：一般以每毫升含細(xì)胞數(shù)來(lái)表示，大方格的面積為1mm2，室深為0.1mm，則體積為0.1mm3。推算得0.1mm3×104，才為1ml體積。所以計(jì)算公式為：細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)）/ml ＝（四個(gè)大格子細(xì)胞數(shù)/4)×104 ×稀釋倍數(shù)；計(jì)數(shù)中，如果細(xì)胞懸液的細(xì)胞濃度過(guò)高，必須稀釋后再計(jì)；如果細(xì)胞數(shù)太少,可離心濃縮后再計(jì)。每個(gè)細(xì)胞懸液至少滴樣兩次求平均值。
⑶用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng):①不要漏計(jì)，不要重復(fù)②細(xì)胞懸液應(yīng)混合均勻③濃度不可過(guò)高也不可過(guò)低。
28.簡(jiǎn)述細(xì)胞生長(zhǎng)曲線繪制過(guò)程及其應(yīng)用。
⑴細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(cell growth curve)是觀測(cè)細(xì)胞在一代生存期內(nèi)的增生過(guò)程的重要指標(biāo)，可根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線分析細(xì)胞增殖速度，確定細(xì)胞傳代、細(xì)胞凍存或具體實(shí)驗(yàn)的最佳時(shí)間。它以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)、細(xì)胞密度為縱坐標(biāo)作坐標(biāo)圖。
⑵制作方法：①培養(yǎng)細(xì)胞：首先在2４孔培養(yǎng)板內(nèi)分別接種相同數(shù)量的細(xì)胞。計(jì)數(shù)并記錄接種的細(xì)胞懸液之密度。②計(jì)數(shù)細(xì)胞密度：從接種時(shí)間算起，每隔24h計(jì)數(shù)３孔內(nèi)的細(xì)胞密度，算出平均值。為提高準(zhǔn)確率，對(duì)每孔細(xì)胞可計(jì)數(shù)2～3次。如此操作至第七天結(jié)束。③繪制曲線：以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)、細(xì)胞密度為縱坐標(biāo)，將全部結(jié)果在坐標(biāo)紙上繪圖，即得所培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。29.簡(jiǎn)述mtt比色法的原理及操作過(guò)程。
⑴原理：活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能將染料mtt(二甲基噻唑二苯基四唑溴鹽)轉(zhuǎn)變?yōu)椴豢扇苄缘淖仙Y(jié)晶，后者被dmso（或酸性異丙醇）溶解后所呈現(xiàn)的色度(用od值表示)反映出活細(xì)胞的代謝水平。死亡細(xì)胞則無(wú)此酶活性。溶液的配制
用pbs液(ph7.2)或者生理鹽水將mtt配成5mg／m1的溶液。（用0.2μm濾膜過(guò)濾）。保存：于4℃避光保存?？捎?周。若暫不用，可凍存。
2.實(shí)驗(yàn)過(guò)程：（1）、將細(xì)胞培養(yǎng)于96孔培養(yǎng)板。（2）、按不同實(shí)驗(yàn)要求處理細(xì)胞。（3）、每孔加入15-20μlmtt液，繼續(xù)培養(yǎng)3～4h。（4）吸去培養(yǎng)液，每孔加入200μldmso,在微型振蕩器振蕩5min,充分溶解混勻。（5）在酶標(biāo)儀上測(cè)定光吸收。測(cè)定波長(zhǎng)為490nm，以只加培養(yǎng)液的的培養(yǎng)皿為空白對(duì)照。
3.結(jié)果分析 ：細(xì)胞存活率=實(shí)驗(yàn)組光吸收值/對(duì)照組光吸收值*100％
4.注意事項(xiàng)：(1)高濃度血清可影響光吸收值,常使用含10%血清的培養(yǎng)液,在加入異丙醇溶液或dmso前盡量吸凈培養(yǎng)液。(2)吸去培養(yǎng)液時(shí)動(dòng)作要慢,以免吸去形成的結(jié)晶。30.簡(jiǎn)述臺(tái)盼藍(lán)排除檢測(cè)法原理
原理：由于死細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性發(fā)生改變，某些染料可大量進(jìn)入?yún)s不被排出，因而細(xì)胞呈色。而活細(xì)胞反之，能排出進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的染料，因而不易著色。此法的原理即是利用死、活細(xì)胞對(duì)染料的不同反應(yīng)而區(qū)分開(kāi)兩種細(xì)胞。最常用的為“臺(tái)盼藍(lán)排除檢測(cè)法”
(2)活體染色與細(xì)胞計(jì)數(shù)：①將1滴細(xì)胞懸液(貼壁細(xì)胞可經(jīng)0.25％胰蛋白酶溶液消化后，吹打制成細(xì)胞懸液)與2滴臺(tái)盼藍(lán)液混合后，滴入細(xì)胞計(jì)數(shù)板。②2min后，在顯微鏡下計(jì)數(shù)至少200個(gè)細(xì)胞。未著色的為活細(xì)胞，呈藍(lán)色的為死細(xì)胞。計(jì)算活細(xì)胞百分比。
注意事項(xiàng):臺(tái)盼藍(lán)染細(xì)胞時(shí)，時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。否則，部分活細(xì)胞也會(huì)著色，會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
暨南大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)真題篇三
動(dòng)物細(xì)胞工程教案
【教學(xué)目標(biāo)】 1．知識(shí)目標(biāo)：
1.1簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程、條件及其應(yīng)用； 1.2簡(jiǎn)述克隆動(dòng)物的概念含義和基本原理
1.3簡(jiǎn)述體細(xì)胞核移植技術(shù)和動(dòng)物克隆技術(shù)，以及應(yīng)用前景 1.4簡(jiǎn)述細(xì)胞融合的方法過(guò)程和單克隆抗體的制備過(guò)程應(yīng)用 1.5關(guān)注克隆技術(shù)的倫理問(wèn)題。2．能力目標(biāo)：
2.1通過(guò)閱讀、自學(xué)、質(zhì)疑、討論、總結(jié)等環(huán)節(jié)，提高獲取知識(shí)、分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力
2.2由植物體細(xì)胞雜交技術(shù)導(dǎo)出動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程，培養(yǎng)學(xué)生的知識(shí)遷移能力和思維能力
2.3通過(guò)設(shè)計(jì)單克隆抗體的制備過(guò)程，使學(xué)生了解生物科學(xué)認(rèn)識(shí)模式發(fā)展學(xué)生的創(chuàng)造性能力。3．情感態(tài)度與價(jià)值目標(biāo)：
3.1 初步培養(yǎng)學(xué)生探索、創(chuàng)新和合作精神
3.2 明確知識(shí)不斷更新并向前發(fā)展，認(rèn)識(shí)到學(xué)無(wú)止境，形成終生學(xué)習(xí)的意識(shí)。
【教學(xué)重點(diǎn)】簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程；舉例說(shuō)出細(xì)胞融合和單克隆抗體；關(guān)注克隆技術(shù)的倫理問(wèn)題。
【教學(xué)難點(diǎn)】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程；細(xì)胞融合技術(shù)和單克隆抗體的制備?！窘虒W(xué)設(shè)計(jì)思路】 采用自學(xué)、指導(dǎo)模式對(duì)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行較深刻、透徹地學(xué)習(xí)，這部分內(nèi)容主要是解決三個(gè)問(wèn)題：（1）為什么要進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)？（2）什么是動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)？（3）怎樣進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)？第三個(gè)問(wèn)題是本節(jié)課的重點(diǎn)。關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程，教師可參照教材中的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程示意圖進(jìn)行講解，講解中要注意區(qū)分原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)這兩個(gè)概念。對(duì)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件，則要從學(xué)生已有的內(nèi)環(huán)境的知識(shí)出發(fā)，啟發(fā)學(xué)生自己動(dòng)腦思考這個(gè)問(wèn)題，以加深對(duì)培養(yǎng)條件的理解。為學(xué)習(xí)其他動(dòng)物細(xì)胞工程打好基礎(chǔ)。在動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)及克隆動(dòng)物的教學(xué)中，可首先讓學(xué)生列舉所知道的克隆動(dòng)物，調(diào)動(dòng)學(xué)生已有的知識(shí)。隨后可向?qū)W生提問(wèn)：克隆動(dòng)物的方法與植物組織培養(yǎng)一樣嗎？然后向?qū)W生說(shuō)明目前動(dòng)物體細(xì)胞克隆是通過(guò)核移植技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，以引入本節(jié)的主題。關(guān)于核移植技術(shù)發(fā)展簡(jiǎn)史，可讓學(xué)生在課堂上閱讀，本節(jié)的重點(diǎn)和難點(diǎn)是在動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)過(guò)程，教材中選用了 “多利羊”為例，來(lái)說(shuō)明體細(xì)胞核移植的過(guò)程。教師應(yīng)充分利用和挖掘教材內(nèi)容，帶領(lǐng)學(xué)生一步步弄清動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)的過(guò)程。對(duì)于體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景和存在的問(wèn)題這部分內(nèi)容，可結(jié)合本節(jié)教材“積極思維”中的有關(guān)問(wèn)題，讓學(xué)生討論。在細(xì)胞融合和單克隆抗體的教學(xué)中，教師啟發(fā)學(xué)生回憶植物體細(xì)胞雜交過(guò)程；通過(guò)新舊知識(shí)對(duì)比，引導(dǎo)學(xué)生大膽推測(cè)動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程，培養(yǎng)學(xué)生知識(shí)遷移能力，并通過(guò)課件演示細(xì)胞融合的全過(guò)程，加強(qiáng)教學(xué)的直觀性，培養(yǎng)學(xué)生的觀察、思維能力。教師要講明動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用，以便自然過(guò)渡到單克隆抗體上來(lái)。關(guān)于單克隆抗體的教學(xué)，教師要利用好教材提供的材料，突出從問(wèn)題入手的思路，先介紹醫(yī)療實(shí)踐中僅靠細(xì)胞培養(yǎng)難以獲得大量抗體，然后，一步一步啟發(fā)學(xué)生討論怎樣解決這個(gè)問(wèn)題。要把科學(xué)家在研制單克隆抗體過(guò)程中，通過(guò)大膽的想像，創(chuàng)造性地解決問(wèn)題的過(guò)程作為本節(jié)教學(xué)的重點(diǎn)和亮點(diǎn)，使學(xué)生在獲得單克隆抗體知識(shí)的同時(shí)，受到創(chuàng)新精神的教育。【教學(xué)課時(shí)】二課時(shí) 【教學(xué)過(guò)程】
（一）導(dǎo)入新課 圖片展示:克隆羊“多利”的復(fù)制品 投影：新華網(wǎng)
克隆羊多利重生 這4只克隆羊在遺傳上與多莉毫無(wú)差異。多莉誕生于14年前，是第一個(gè)使用成熟細(xì)胞克隆的哺乳動(dòng)物?？寺⊙蚨嗬?dolly)已經(jīng)獲得“重生”。最初進(jìn)行此項(xiàng)克隆研究的英國(guó)科學(xué)家又培育出4只克隆羊，被形象地稱(chēng)之為“dollies”(多莉的復(fù)數(shù))。它們是多莉的復(fù)制品，在遺傳上與多莉絲毫不差，多莉在7年前離開(kāi)這個(gè)世界。
問(wèn)題導(dǎo)入
師：克隆羊“多利”的重生，采用的是什么技術(shù)？ 生：細(xì)胞工程技術(shù)？
師：動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)到底是干啥的？下面請(qǐng)同學(xué)們帶著以下問(wèn)題閱讀與總結(jié)：（閱讀課本p53,回答）
一、動(dòng)物細(xì)胞工程：
1、主要理論依據(jù)？ 2技術(shù)手段？ 學(xué)生：1.細(xì)胞生物學(xué) 分子生物學(xué)
2.①動(dòng)物細(xì)胞和組織培養(yǎng) ②細(xì)胞核移植③體細(xì)胞克隆④細(xì)胞融合⑤單克隆抗體制備
3.①探索并改造生物的遺傳特性，②大量培養(yǎng)細(xì)胞。
師：動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)是細(xì)胞工程的基礎(chǔ)，它開(kāi)始于20世紀(jì)初期，那么動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)主要是指什么？請(qǐng)讀課本p53-54,完成以下內(nèi)容。
二、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)：
1、概念： ①材料：取自 ； ②場(chǎng)所： 模擬動(dòng)物體 ；
③條件：在、和 等條件下； ④目的：
使
動(dòng)
物
細(xì)
胞
或
組
織
繼續(xù)。
學(xué)生：①動(dòng)物胚胎或出生后不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織
②體外 體內(nèi)環(huán)境 ③無(wú)菌 溫度適宜 營(yíng)養(yǎng)充足 ④生長(zhǎng)、增殖并維持原有結(jié)構(gòu)和功能
師：動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)是指在體外模擬動(dòng)物體內(nèi)環(huán)境，將動(dòng)物體細(xì)胞或組織，在無(wú)菌、溫度適宜和營(yíng)養(yǎng)充足條件下培養(yǎng)，使其繼續(xù)生長(zhǎng)、增殖并維持原有結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。那么請(qǐng)同學(xué)們思考并討論一下問(wèn)題：（投影展示）
1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理是什么？
學(xué)生：
1、細(xì)胞增殖
2、為什么要取動(dòng)物胚胎或出生后不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織進(jìn)行培養(yǎng)？
學(xué)生：因?yàn)檫@些組織或器官上的細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強(qiáng)。一般幼體細(xì)胞比老齡細(xì)胞易培養(yǎng)，分化程度低的細(xì)胞比分化程度高的細(xì)胞易培養(yǎng)。
3、動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)需要滿足哪些條件？ 學(xué)生：①無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：（添加一定量的抗生素；定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝產(chǎn)物。）②營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(引導(dǎo)學(xué)生引導(dǎo)學(xué)生引導(dǎo)學(xué)生引導(dǎo)學(xué)生區(qū)分天然培養(yǎng)基與合成培養(yǎng)基區(qū)分天然培養(yǎng)基與合成培養(yǎng)基區(qū)分天然培養(yǎng)基與合成培養(yǎng)基區(qū)分天然培養(yǎng)基與合成培養(yǎng)基)（無(wú)機(jī)鹽、葡萄糖、氨基酸、核酸、維生素、動(dòng)物血清等。）③溫度和ph：37℃, 7.2-7.4 ④氣體環(huán)境： o2和co2（95%空氣和5% co2）
4、組織分散成單個(gè)細(xì)胞的方法是什么？ 學(xué)生：用胰蛋白酶處理。教師補(bǔ)充：動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來(lái)形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。
5、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？ 學(xué)生：不能，因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的ph為7.2—7.4，此環(huán)境下胃蛋白酶（2.0）沒(méi)有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。投影展示：動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)過(guò)程
示
意
圖
10代細(xì)胞 教師：：：： 懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱(chēng)為細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱(chēng)為細(xì)胞的接觸抑制。
思考：細(xì)胞發(fā)生接觸抑制后如何使細(xì)胞繼續(xù)分裂增殖？ 學(xué)生：將原代培養(yǎng)的細(xì)胞分離稀釋后轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱(chēng)為傳代培養(yǎng)。
思考：傳代培養(yǎng)的細(xì)胞能一直傳代下去嗎？
細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到40～50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。
細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無(wú)限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。教師引導(dǎo)學(xué)生總結(jié)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程。
過(guò)渡：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？我們來(lái)一起比較一下這兩個(gè)過(guò)程：比較項(xiàng)目 植物組織培養(yǎng) 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 因此，目前還不能用類(lèi)似植物組織培養(yǎng)的方法獲得完整的動(dòng)物個(gè)體，用動(dòng)物體細(xì)胞克隆的動(dòng)物，實(shí)際是通過(guò)核移植來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
三、細(xì)胞核移植與動(dòng)物體細(xì)胞克隆: 讀課本p54-57,完成以下內(nèi)容。
1、體細(xì)胞克?。?是將供體 的細(xì)胞核與受體去核 的細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行，借助于 的發(fā)育能力，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)發(fā)育成 進(jìn)而形成 的技術(shù)。其關(guān)鍵是。
學(xué)生：細(xì)胞核 卵細(xì)胞 人工組合 卵細(xì)胞 胚胎 個(gè)體 細(xì)胞核移植技術(shù)
2、細(xì)胞核移植： 是一種利用 將某種動(dòng)物細(xì)胞的移入
或
動(dòng)物的去除細(xì)胞核的成熟 內(nèi)的技術(shù)。
學(xué)生：：：：顯微操作技術(shù) 細(xì)胞核 同種 異種
3、展示克隆羊“多利”產(chǎn)生過(guò)程歸納克隆流程： 供體細(xì)胞 →
①
-------→ ③------→ 早期胚胎------→ 代孕動(dòng)物 受
體
細(xì)
胞
→
②
-------→ 克隆個(gè)體
學(xué)生：細(xì)胞核 去核的卵細(xì)胞 融合的細(xì)胞
問(wèn)題：1）、上述多利羊的成功培育過(guò)程表明了什么？也反映出了什么問(wèn)題？
學(xué)生：動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性。許多克隆動(dòng)物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過(guò)大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等。
2）、書(shū)上說(shuō)治療性克隆和生殖性克隆的大討論，你有何觀點(diǎn)，請(qǐng)說(shuō)出來(lái)。你認(rèn)為生殖性克隆會(huì)帶來(lái)哪些倫理上的問(wèn)題？（發(fā)散思維）3）克隆個(gè)體性狀與親本性狀的關(guān)系怎樣？ 學(xué)生：克隆個(gè)體性狀與供核親本性狀一致。
4、意義：在克服動(dòng)物、創(chuàng)造 等方面有重要意義。
學(xué)生：種間雜交繁殖障礙 新物種
5、應(yīng)用① ；② ； ③ 等。
學(xué)生：①利用克隆技術(shù)大量復(fù)制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，減少實(shí)驗(yàn)誤差；②利用異種動(dòng)物借腹妊娠挽救珍稀動(dòng)物 ；③利用患者自身的細(xì)胞培育新的組織和器官以治療疾病。
四、細(xì)胞融合與單克隆抗體：讀課本p57,完成以下內(nèi)容。
（一）細(xì)胞融合：
1、概念：指在一定的條件下將 或 細(xì)胞 為 的過(guò)程。
2、結(jié)果：形成，如。
3、原理：
學(xué)生：
1、2個(gè) 多個(gè) 融合 一個(gè)細(xì)胞
2、雜種細(xì)胞 鼠—雞、鼠—猴等
3、細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性
4、物理法、化學(xué)法和生物法
5、制備單克隆抗體 動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較：：：： 植物體細(xì)胞雜交（獲得雜種植株）動(dòng)物細(xì)胞融合（制備單抗）原理 融合前的處理 促融方法 意義和用途 過(guò)渡：何為單克隆抗體？
（二）單克隆抗體：：：：讀課本p58-59,完成以下內(nèi)容。
1、概念：用單個(gè)b淋巴細(xì)胞進(jìn)行，形成，其就可能產(chǎn)生出化學(xué)性質(zhì)、的抗體——單克隆抗體。學(xué)生：無(wú)性繁殖細(xì)胞群?jiǎn)我恍?/p>
暨南大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)真題篇四
第二節(jié) 細(xì)胞工程簡(jiǎn)介──動(dòng)物細(xì)胞工程
教學(xué)目標(biāo) 1．知識(shí)方面
（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（知道）。（2）動(dòng)物細(xì)胞融合（知道）。
（3）單克隆抗體的制備及應(yīng)用（知道）。2．態(tài)度觀念方面
（1）初步培養(yǎng)學(xué)生勇于探索，不斷創(chuàng)新的精神和合作精神。
（2）通過(guò)向?qū)W生介紹幾大動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的發(fā)展動(dòng)態(tài)及一些新的研究成果，使學(xué)生明確人們對(duì)生命奧秘的揭示愈加廣泛和深入，知識(shí)不斷更新并向前發(fā)展。認(rèn)識(shí)到學(xué)無(wú)止境，形成終生學(xué)習(xí)的意識(shí)。
3．能力方面
（1）在學(xué)習(xí)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，學(xué)生通過(guò)閱讀、自學(xué)、質(zhì)疑、討論、訓(xùn)練、總結(jié)等環(huán)節(jié)，逐步提高獨(dú)立獲取知識(shí)的能力、邏輯思維能力、分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力。
（2）由植物體細(xì)胞雜交技術(shù)導(dǎo)出動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程，培養(yǎng)學(xué)生的知識(shí)遷移能力、思維能力。
（3）讓學(xué)生嘗試設(shè)計(jì)革克隆抗體的制備過(guò)程，指導(dǎo)學(xué)生掌握獲取知識(shí)和探索生物科學(xué)的基本方法，使學(xué)生了解生物科學(xué)認(rèn)識(shí)模式以發(fā)展學(xué)生的創(chuàng)造性能力。
重點(diǎn)、難點(diǎn)分析
單克隆抗體既是本小節(jié)的重點(diǎn)，也是難點(diǎn)內(nèi)容。
分析：動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合、單克隆抗體、胚胎移植、核移植等。其中前三大技術(shù)為本節(jié)教材的主體內(nèi)容，而胚胎移植、核移植技術(shù)以小字科普讀物的形式出現(xiàn)，意在使學(xué)生在有所側(cè)重的前提下對(duì)動(dòng)物細(xì)胞工程發(fā)展概況有一個(gè)較全面的了解。在教材重點(diǎn)介紹的三大動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)中，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是其他技術(shù)（如單克隆抗體、胚胎移植、核移植等）的基礎(chǔ)，其價(jià)值更多的是通過(guò)其他技術(shù)成果來(lái)體現(xiàn)的。而動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)目前較為成熟的最重要的用途便是制備單克隆抗體。由此可見(jiàn)，單抗技術(shù)應(yīng)屬較高層次的動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)。對(duì)它的學(xué)習(xí)有助于學(xué)生較深刻地領(lǐng)悟動(dòng)物細(xì)胞工程的真諦，并從兩位諾貝爾獎(jiǎng)獲得者對(duì)單抗獨(dú)具匠心的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，深刻體會(huì)科學(xué)態(tài)度、科學(xué)方法，尤其是創(chuàng)造性的思維品質(zhì)在科學(xué)研究、發(fā)明創(chuàng)造中的決定性作用?；谝陨险J(rèn)識(shí)，單克隆抗體應(yīng)列為本節(jié)的重點(diǎn)內(nèi)容，同時(shí)單克隆抗體技術(shù)本身環(huán)節(jié)多、技術(shù)復(fù)雜，加之學(xué)生對(duì)此缺乏必要的感性認(rèn)識(shí)，所以也是本課的難點(diǎn)所在。
教學(xué)模式
自學(xué)——指導(dǎo)。啟發(fā)、探究。教學(xué)手段
1．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的自制掛圖。
2．動(dòng)物細(xì)胞融合、單克隆抗體制備過(guò)程的教學(xué)課件。3．有關(guān)克隆羊“多莉”的錄像資料。4．實(shí)物投影儀。課時(shí)安排 二課時(shí)。設(shè)計(jì)思路
1．采用自學(xué)、指導(dǎo)模式對(duì)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行較深刻、透徹地學(xué)習(xí)，為學(xué)習(xí)其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)打好基礎(chǔ)。2．教師啟發(fā)學(xué)生回憶植物體細(xì)胞雜交過(guò)程；通過(guò)新舊知識(shí)對(duì)比，引導(dǎo)學(xué)生大膽推測(cè)動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程，培養(yǎng)學(xué)生知識(shí)遷移能力，并通過(guò)課件演示全過(guò)程，加強(qiáng)直觀性，培養(yǎng)學(xué)生的觀察、思維能力。
3．教師給出資料，引出探究點(diǎn)。學(xué)生通過(guò)討論、辯論，設(shè)計(jì)多種制備革克隆抗體的方案。然后通過(guò)觀察全過(guò)程課件，質(zhì)疑、釋疑（多方向），并由學(xué)生概括單克隆抗體的制備工程。
4．胚胎移植、核移植為書(shū)中小字內(nèi)容，以學(xué)生自學(xué)為主，教師予以適當(dāng)指導(dǎo)、點(diǎn)撥。5．以“多莉”羊的培育過(guò)程為主線，將動(dòng)物細(xì)胞工程五種技術(shù)的知識(shí)有機(jī)地串接起來(lái)，構(gòu)成完整的知識(shí)體系。
重點(diǎn)提示
1．在教學(xué)中，應(yīng)強(qiáng)化學(xué)生的主體意識(shí)，開(kāi)發(fā)學(xué)生的潛能，使學(xué)生的個(gè)性在共性發(fā)展的同時(shí)也能協(xié)調(diào)發(fā)展，使知識(shí)不單是講課的內(nèi)容，考試的內(nèi)容，而成為有利于學(xué)生綜合素質(zhì)全面提高的載體和素材。教師應(yīng)善于從教材內(nèi)容和學(xué)生心理狀態(tài)出發(fā)，采用多種方法設(shè)計(jì)富有啟發(fā)性的問(wèn)題，創(chuàng)設(shè)探索的情境，激發(fā)學(xué)生思考和探索的欲望，從而達(dá)到在獲取知識(shí)的同時(shí)培養(yǎng)他們的多方面能力的目的。
2．適當(dāng)增加難度，能在教學(xué)過(guò)程中引起學(xué)生適度的認(rèn)識(shí)沖突。前蘇聯(lián)教育家贊可夫就極力主張“高難度原則”，以求得學(xué)生在一定困難水平出現(xiàn)認(rèn)知沖突，增強(qiáng)學(xué)生參與討論的積極性，促進(jìn)其發(fā)展。
3．在教學(xué)過(guò)程中，適度拓寬教學(xué)內(nèi)容，擴(kuò)大學(xué)生的知識(shí)面，開(kāi)發(fā)學(xué)生的思維空間，有利于學(xué)生發(fā)散性思維的培養(yǎng)。
4．根據(jù)學(xué)生的認(rèn)知水平和教學(xué)內(nèi)容的難易程度，合理安排教學(xué)容量，控制好課堂教學(xué)的密度；該講的要講深、講透，并善于從多角度、多層面來(lái)挖掘知識(shí)的蘊(yùn)含，從而把握好教學(xué)的力度；同時(shí)還要注意課堂節(jié)奏的急緩、疏密、錯(cuò)落有致。
教學(xué)過(guò)程
暨南大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)真題篇五
生物化學(xué)復(fù)習(xí)題
第一章: 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能
1．蛋白質(zhì)元素組成，利用何種元素可推算出其在樣品中含量？ 2．組成蛋白質(zhì)的氨基酸基本分類(lèi)，根據(jù)是什么？
3．蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)與空間結(jié)構(gòu)（二、三、四級(jí)，基元）概念，穩(wěn)定力量。4．α－螺旋和β－折疊的結(jié)構(gòu)特征。5．多肽鏈中氨基酸測(cè)定，主要分析方法。6．蛋白質(zhì)分子量測(cè)定基本方法有幾種？ 7．蛋白質(zhì)變性及理化性質(zhì)改變的特征
8．何謂蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)（pi）？在酸性或堿性環(huán)境中，某一pi的蛋白質(zhì)帶電荷會(huì)一樣嗎？會(huì)帶何種電荷？ 9．蛋白質(zhì)親水膠體特征及穩(wěn)定因素。10．蛋白質(zhì)分離純化基本依據(jù)？常用方法。
第二章: 核酸的結(jié)構(gòu)與功能
1．單核苷酸的組成成分，及其各成分之間的連接方式
atp、nad、andp、fad、camp的組成和中文讀法 2．dna分子一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)結(jié)構(gòu)概念
（注意原核與真核生物的相似與區(qū)別）
3．參與pr生物合成的三種rna（trna、rrna、mrna）細(xì)胞含量、分子大小、穩(wěn)定性、構(gòu)成或構(gòu)型。4．核酸的理化性質(zhì)包含哪幾個(gè)方面？
5．核酸變性、復(fù)性、雜交概念（注意在某一種情況下構(gòu)型的變化）6．dna、rna分離純化的基本原則
7．核酸含量的測(cè)定方法有幾種？方法的建立以何種核酸成分為基礎(chǔ)的？
第三章: 酶
1．作為生物催化劑的特點(diǎn) 2．何謂酶的專(zhuān)一性？分幾類(lèi)？
3．酶分類(lèi)的根據(jù)？分幾類(lèi)？命名分類(lèi)？ 4．全酶構(gòu)成？各成分在酶促反應(yīng)中作用？ 5．金屬離子在酶分子中作用？
6．b族vit輔酶形式是什么？一般有何作用？ 7．酶的活性中心及必需基團(tuán)？ 8．酶促反應(yīng)影響因素有哪些？ 9．最適ph，最適t，km意義。10．酶高效率的機(jī)制？
11．何謂酶的抑制作用？抑制劑分類(lèi)？
12．競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑與非競(jìng)爭(zhēng)抑制劑對(duì)酶的抑制作用方式各是怎樣？
對(duì)km，vmax影響如何？
13．從對(duì)酶作用考慮，有機(jī)磷中毒與重金屬中毒機(jī)理及急救機(jī)理？ 14．寡聚酶，同工酶，誘導(dǎo)酶。15．酶的活性單位定義。
第四章: 糖代謝 1．糖的化學(xué)本質(zhì)是什么？糖類(lèi)在體內(nèi)有何生理功能？ 2．什么是糖酵解？有何生理意義？
3．何謂有氧氧化？有氧氧化主要分為幾個(gè)階段？有何生理意義？ 4．何謂三羧酸循環(huán)？有何生理作用？ 5．什么是磷酸戊糖途徑？有何生理意義？ 6．什么是糖異生？其生理意義是什么？ 7．試述丙酮酸是如何異生成糖的？ 8．糖原是如何合成和分解的？
9．試比較肝糖原與肌糖原的合成有何異同點(diǎn)？
10．食物中的淀粉是怎樣被消化吸收的？又怎樣轉(zhuǎn)變成肝糖原？
11．比較糖代謝各途徑在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行的部位、關(guān)鍵酶、產(chǎn)物、atp的生成與消耗情況。
12．下列反應(yīng)中各需何種輔助因素或輔酶？各起何作用？
（1）丙酮酸→ 乳酸；（2）葡萄糖 → 6一磷酸葡萄糖；（3）糖原（gn）→ 糖原（gn＋l）（4）琥珀酰coa→琥珀酸十 hscoa；（5）丙酮酸十 co2→草酰乙酸；
（6）3-磷酸甘油醛十 pi→ 1，3一二磷酸甘油酸；
（7）1，3-二磷酸甘油酸→ 3-磷酸甘油酸。13．寫(xiě)出糖酵解和糖異生途徑的關(guān)鍵酶
14．6一磷酸葡萄糖、1，6—二磷酸果糖、草酰乙酸是如何徹底氧化的？每 1分子分解時(shí)，各產(chǎn)生多少atp？ 15．什么是巴斯德效應(yīng)？
16．什么是乳酸循環(huán)？其生理意義是什么？
17．血糖的來(lái)源和去路有那些？胰島素，胰高血糖素，糖皮質(zhì)激素，腎上腺素如何調(diào)節(jié)血糖？ 18．什么是糖原累積癥？
第五章: 脂類(lèi)酸代謝
1.飽和脂酸如何氧化供能？
2.計(jì)算軟脂酸氧化成水和co2時(shí)，可使多少adp磷酸化生成atp？ 3.在體內(nèi)糖如何轉(zhuǎn)變成脂肪？
4.何謂酮體？酮體是如何生成和氧化？酮體代謝有何生理意義？ 5.血漿脂蛋白可分為那幾類(lèi)？各有何生理功用？
6.何謂脂肪動(dòng)員？何謂載脂蛋白？何謂脂肪酸的β-氧化？ 7.何謂營(yíng)養(yǎng)必需脂肪酸？ 8.試述vldl和ldl代謝？
9.列舉下列通路的限速酶及其調(diào)節(jié)因素。
（1）脂肪酸合成（2）脂肪動(dòng)員（3）膽固醇含成 10.說(shuō)明下列通路的生理意義。
（1）甘油一酯支路（2）檸檬酸一丙酮酸循環(huán)（3）脂肪酸β-氧化
11.膽汁酸鹽在脂類(lèi)消化吸收中有何作用？ 12.絲氨酸如何轉(zhuǎn)變成卵磷脂中膽鹼？
13.計(jì)算硬脂酸（c18）徹底氧化時(shí)生成的 a t p量及合成一分子硬脂酸需要的a t p、nadph及乙酰coa的量。14.脂肪酸進(jìn)入肝臟后有哪幾條去路？
15.膽固醇及脂肪酸合成所需原料如何從糖代謝得到供應(yīng)。16.進(jìn)食糖類(lèi)是通過(guò)哪些環(huán)節(jié)而促進(jìn)脂肪合成的？ 17.比較脂肪酸合成與脂肪酸β-氧化過(guò)程的區(qū)別。
第六章:生物氧化
1．解釋下列名詞
（1）生物氧化（2）細(xì)胞色素（3）呼吸鏈（4）氧化磷酸化（5）p／o值（6）解偶聯(lián)劑
3．請(qǐng)寫(xiě)出nadh氧化及琥珀酸氧化的二條呼吸鏈并比較在組成上的異同點(diǎn)。4．組織中肌酸有何生理功能？
5．動(dòng)物注射2，4一二硝基苯酚，會(huì)立即出現(xiàn)體溫升高，何故？
6．請(qǐng)寫(xiě)出呼吸鏈抑制劑在呼吸鏈中的作用？為何說(shuō)氰化物對(duì)機(jī)體是劇毒物質(zhì)？ 7．電子傳遞鏈概念及排列組成 8．電子傳遞鏈中atp產(chǎn)生的部位
9．線粒體外還原當(dāng)量轉(zhuǎn)運(yùn)入線粒體內(nèi)的兩條途徑？
第七章: 氨基酸代謝
1．氮平衡及狀態(tài)及意義？營(yíng)養(yǎng)必需aa 食物pr的互補(bǔ)作用 2．蛋白質(zhì)的消化、吸收與腐敗 3．體內(nèi)蛋白質(zhì)降解途徑
4．聯(lián)合脫氨基作用形式及部位特征 5．α－酮酸的去路 6．氨的來(lái)源、轉(zhuǎn)運(yùn)與去路
7．鳥(niǎo)氨酸循環(huán)、部位，過(guò)程，調(diào)節(jié) 8．高血氨癥；肝昏迷氨中毒學(xué)說(shuō)
9．γ－氨基丁酸（ｇａｂａ）、牛磺酸、組胺、５－羥色胺、多胺來(lái)源于哪些aa？
10．一碳單位及來(lái)源、生理功用
11．巨幼紅細(xì)胞貧血與一碳單位和甲硫氨酸循環(huán)關(guān)聯(lián)？ 12．甲硫氨酸循環(huán)過(guò)程及生理意義 13．何謂活性甲基、活性硫酸？來(lái)源？ 14．心肌損傷患者哪種轉(zhuǎn)氨酶和肌酸激酶升高？
15．tyr與那些神經(jīng)遞質(zhì)生成有關(guān)？白化癥，黑尿酸癥，巴金森氏與其有何關(guān)聯(lián)？
第八章: 核苷酸代謝
1．核酸消化吸收的基本過(guò)程及其有關(guān)的消化酶。
2．核酸在體內(nèi)分解代謝的基本反應(yīng)通路，嘌呤與嘧啶的分解產(chǎn)物是什么？ 3．嘌呤和嘧啶的合成原料是什么？ 4．嘌呤嘧啶合成途徑有哪些？特點(diǎn)？ 5．脫氧核糖核酸如何生成？
6．什么是嘌呤和嘧啶核苷酸合成的補(bǔ)救通路？ 7．體內(nèi)如何調(diào)節(jié)嘌呤和嘧啶核苷酸的合成？
第九章: 物質(zhì)代謝調(diào)節(jié)
1．物質(zhì)代謝的特點(diǎn) 2．物質(zhì)代謝的相互聯(lián)系 3．組織、器官的代謝特點(diǎn)及聯(lián)系（營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)互變關(guān)系）4．代謝調(diào)節(jié) 細(xì)胞水平：
酶的隔離分布意義，選擇幾條相關(guān)的代謝途徑說(shuō)明 代謝調(diào)節(jié)是通過(guò)對(duì)關(guān)鍵酶活性的調(diào)節(jié)實(shí)現(xiàn)
5．酶活性調(diào)節(jié)方式：
快速調(diào)節(jié)：
變構(gòu)調(diào)節(jié)及化學(xué)修飾調(diào)節(jié)概念、方式、意義
遲緩調(diào)節(jié)：
通過(guò)對(duì)酶蛋白分子的合成或降解改變細(xì)胞內(nèi)酶量。
激素水平的代謝調(diào)節(jié)：
整體調(diào)節(jié)：
6．饑餓，應(yīng)急狀態(tài)三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝狀態(tài)如何？
第十章: dna的生物合成
1．遺傳信息傳遞的中心法則，半保留復(fù)制 2．簡(jiǎn)述原核生物dna-pol的種類(lèi)及其作用？ 3．dna聚合酶的即時(shí)校讀
4．dna復(fù)制的保真性所依賴的三種機(jī)制。5．復(fù)制的半不連續(xù)性，崗崎片斷
6．參與原核生物dna復(fù)制的各種酶與蛋白質(zhì)及其作用。
7．何謂突變，突變有哪些類(lèi)型。（了解影響突變的因素有哪些）8．簡(jiǎn)述dna損傷的三種主要修復(fù)方式。
9．逆轉(zhuǎn)錄及逆轉(zhuǎn)錄酶的三種活性。
第十一章: rna的生物合成
1．轉(zhuǎn)錄，模板鏈，不對(duì)稱(chēng)轉(zhuǎn)錄，核心酶（α2ββˊ），斷裂基因 2．何謂啟動(dòng)子，原核生物啟動(dòng)子中有哪些特征序列，作用如何？ 3．簡(jiǎn)述原核生物轉(zhuǎn)錄起始過(guò)程。4．簡(jiǎn)述原核生物轉(zhuǎn)錄終止的兩種形式。5．簡(jiǎn)述真核生物中mrna和trna的轉(zhuǎn)錄后加工 6．試比較復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過(guò)程有何相似和不同。
第十二章: 蛋白質(zhì)的生物合成
1．順?lè)醋?遺傳密碼* 開(kāi)放閱讀框架* s-d序列 2．遺傳密碼有哪些特點(diǎn)？（特點(diǎn)中涉及的概念要掌握）3．氨基酰-trna合成酶的功能及作用特點(diǎn)？ 4．在蛋白質(zhì)合成過(guò)程中，各種rna起什么作用？ 5．簡(jiǎn)述蛋白質(zhì)生物合成的延長(zhǎng)過(guò)程。6．多聚核蛋白體
7．翻譯后加工包括哪些方面？ 8．分子伴侶
9．以分泌蛋白進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)為例，理解蛋白質(zhì)的靶向輸送。
第十三章: 基因表達(dá)調(diào)控 1．概念：基因表達(dá)、管家基因、組成性表達(dá)、操縱子、基因重組、sos反應(yīng) 2．基因表達(dá)的規(guī)律 3．基因表達(dá)的方式
4．基因轉(zhuǎn)錄激活調(diào)節(jié)與哪些基本要素有關(guān)？ 5．原核生物轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的特點(diǎn) 6．何謂乳糖操縱子？其結(jié)構(gòu)組成？
7．在以下?tīng)顟B(tài)時(shí)，乳糖操縱子是開(kāi)啟還是關(guān)閉的？為什么？如開(kāi)啟，其轉(zhuǎn)錄水平如何？為什么？
a．培養(yǎng)基中同時(shí)存在高濃度g和乳糖 b．培養(yǎng)基中只存在乳糖
c．培養(yǎng)基中存在低濃度g和高濃度乳糖
8．trp operon，均為轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)機(jī)制，各自的調(diào)節(jié)機(jī)制特點(diǎn)是什么？ 9．真核生物基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及表達(dá)調(diào)控特點(diǎn)。
10．葡萄糖存在時(shí)，大腸桿菌不能利用乳糖，當(dāng)葡萄糖耗盡后，大腸桿菌才利用乳糖。請(qǐng)運(yùn)用所學(xué)乳糖操縱子的有關(guān)知識(shí)解釋其機(jī)制。
第十四章: 基因工程與基因重組
1．自然界常見(jiàn)基因轉(zhuǎn)移及重組現(xiàn)象有哪些？掌握其定義？ 2．dna克隆技術(shù)基本步驟？ 3．常用的工具酶有幾種？ 4．何謂基因載體？有幾類(lèi)？
5．有哪些方法可以使外源dna和載體dna連接。6．常見(jiàn)的重組體的篩選方式分類(lèi)？舉例說(shuō)明。
7．現(xiàn)有一研究項(xiàng)目，擬從人dna中獲得特定的長(zhǎng)約1000bp的片段（此片段編碼某生長(zhǎng)因子），并擬將此生長(zhǎng)因子大量生產(chǎn)。請(qǐng)你根據(jù)所學(xué)知識(shí)（可參閱其它有關(guān)資料），擬出一個(gè)可行的方案來(lái)。8．基本概念：同源重組、特異位點(diǎn)的重組、轉(zhuǎn)化作用、轉(zhuǎn)座子、dna克隆、限制性核酸內(nèi)切酶、粘性末端、鈍性末端、配伍末端、基因組dna文庫(kù)、cdna文庫(kù)、基因診斷、基因治療
第十五章: 細(xì)胞信息轉(zhuǎn)導(dǎo)
1．細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的信息物質(zhì)分類(lèi)。2．受體？受體分類(lèi)（膜受體分類(lèi)及結(jié)構(gòu)特征）3．受體作用特點(diǎn) 4．傳導(dǎo)途徑：
畫(huà)一簡(jiǎn)單示意圖，將膜受體介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑小結(jié)，歸納。
并注意傳導(dǎo)途徑中環(huán)節(jié)的激活的機(jī)制（如g蛋白活化，pka激活，ip3與胞內(nèi)鈣升高關(guān)系等）。
5．掌握camp－pka，ca2+－依賴性蛋白激酶激活途徑。6．受體激酶活性的有關(guān)途徑
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