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血涂片的制備與染色實驗 血涂片制備與染色注意事項篇一
血涂片是通過特定的方法將血液按一定方向均勻涂開的過程，微觀上使細胞是由球形變?yōu)槠矫嫘位蚪矫嫘纹戒佋谳d
玻
片上。血涂片的顯微鏡檢查是血液細胞形態(tài)學(xué)檢查的基本步驟，特別是對于各種血液病的診斷和鑒別診斷，具有重要價值。血涂片制備是否合格、染色的好壞直接關(guān)系到檢驗結(jié)果的質(zhì)量。
1.載
玻
片的準備新載
玻
片常帶有游離堿質(zhì)，須用濃度為lmol/l的hcl浸泡24h，再用清水徹底沖洗，干燥后備用。舊載玻
片要用含洗滌劑的清水中煮沸20min，洗掉血膜，再用清水反復(fù)沖洗，最后用0.95l/l乙醇浸泡1h，干燥備用。使用載
玻
片時，不要用手觸及玻
片表面，保持玻
片清潔、干燥、中性、無油膩。2.血涂片制作方法
取血液標本一滴置載
玻
片的一端，以邊緣平滑的推片一端，從血滴前沿方向接觸血液，使血液沿推片散開，推片與載玻
片保持30～45○夾角，平穩(wěn)地向前推動，血液即在載玻
片上形成薄層血膜。涂片的厚薄與血滴大小、推片與載
玻
片之間的角度、推片時的速度及血細胞比容有關(guān)。血滴大、角度大、速度快則血膜越厚;反之則血膜越薄。一張良好的血涂片，要求厚薄適宜，頭體尾明顯，細胞分布均勻，血膜邊緣整齊并留有的空隙。
染色的目的是使細胞的主要結(jié)構(gòu)，如細胞膜、細胞質(zhì)、細胞核等染上不同的`顏色，以便于鏡下觀察識別。
血涂片染色包括兩個過程：固定和染色。固定是將細胞蛋白質(zhì)和多糖等成分迅速交聯(lián)凝固，以保持細胞原有形態(tài)結(jié)構(gòu)不發(fā)生變化。常用的染色方法有瑞特染色法(wright)、姬姆薩染色法(giemsa)等。
1.瑞特(wright)染色法
本法的特點是將固定和染色合并在一起進行，手續(xù)簡便，染色時間短，對白細胞特異性顆粒著色較好，但對核的著色略差。
2.姬姆薩(giemsa)染色法姬姆薩染料由天青和酸性染料伊紅組成的復(fù)合染料。染色原理、緩沖液與瑞特染色法大致相同。本法對細胞核結(jié)構(gòu)和寄生蟲著色較好，結(jié)構(gòu)顯示更為清晰，但細胞質(zhì)和顆粒著色較差。
3.瑞-姬染色法
瑞特染色液和姬姆薩染色液對細胞進行染色時有各自的顯色特征，前者對細胞漿和顆粒著色較好，后者對對細胞核結(jié)構(gòu)顯示清晰。因此將瑞特染料和姬姆薩染料混合，甲醇溶解后組成瑞-姬染色液能取長補短，優(yōu)勢互補，其中所使用的緩沖液與瑞特染色法相同。用該混合染液對血細胞進行染色，細胞核、細胞漿和細胞內(nèi)顆粒著色均有上佳表現(xiàn)，著色鮮艷，對比鮮明，是臨床上廣泛使用的方法。
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